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兩天完成泛癌基因組體細胞突變靶向重測序擴增子建庫
TruSeq Amplicon - Cancer Panel
英文名稱:TruSeq® Amplicon - Cancer Panel,縮寫TSACP
中文名稱:TruSeq 擴增子法癌癥Panel
用途:癌癥基因組體細胞突變擴增子建庫試劑盒,適用于FFPE樣本。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel 提供預先設(shè)計的、優(yōu)化的寡核苷酸探針,富集212個擴增子來檢測48個癌癥相關(guān)基因中的突變區(qū)域。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel能夠?qū)Π˙RAF,KRAS和EGFR在內(nèi)的重要癌癥相關(guān)基因進行高度敏感的突變分析。這些基因突變與許多癌癥有關(guān),包括黑色素瘤,結(jié)直腸癌,卵巢癌和肺癌。這種檢測方法從珍貴的FFPE樣品篩選這些重要變異的*能力將從多種腫瘤中解開大量基因組信息。
The TruSeq Amplicon - Cancer Panel enables highly sensitive mutation detection studies of important cancer-related genes, including BRAF, KRAS, and EGFR. Mutations in these genes are linked to many cancers, including melanoma, colorectal, ovarian, and lung cancer.
TSACP特點
提供預先設(shè)計的,優(yōu)化的寡核苷酸探針,用于測序> 35千堿基(kb)的靶基因組序列中的突變熱點。
在高度多重的單管反應(yīng)中,用212個擴增子靶向48個基因。
對來自選定基因(如BRAF,KRAS和EGFR)的數(shù)百個癌癥熱點進行測序。
兩天內(nèi)完成基因組DNA的全面分析數(shù)據(jù)。
zui準確的數(shù)據(jù)能夠可靠地檢測低于5%的突變頻率。
使用簡單的儀器上自動分析軟件對所有樣品進行變異調(diào)用和分析。
TSACP應(yīng)用
泛癌分析:快速高效地發(fā)現(xiàn)、驗證和篩選癌癥相關(guān)遺傳變異。
TSACP參數(shù)
分析時間 8 hours
手動操作 3.5 hours
加樣量 150 ng high-quality genomic DNA, 250 ng FFPE genomic DNA
測序儀 MiniSeq, MiSeq, MiSeqDx in Research Mode
核酸 DNA
特別樣本 FFPE Tissue 福爾馬林固定包埋組織
突變類型Insertions-Deletions (indels), Somatic Variants
種屬 人
癌癥類型 Pan-Cancer 泛癌
方法 擴增子測序 靶向基因測序Amplicon Sequencing, Targeted DNA Sequencing
TSACP適用樣本
高質(zhì)量基因組DNA:250ng(推薦),150ng(zui低)
FFPE基因組DNA:250ng (zui低)
簡化的操作流程
TSACP將一些操作流程簡化,包括FFPE樣品的DNA質(zhì)量控制分析,簡單磁珠樣品標準化,自動化簇生成和雙端測序以及儀器上的數(shù)據(jù)分析。利用MiSeq系統(tǒng)的長雙端讀取能力,速度和高數(shù)據(jù)質(zhì)量,現(xiàn)在可以在幾天內(nèi)完成整個項目,而不是幾個月。
樣本質(zhì)控—樣本目標基因的擴增子獲得—擴增子測序和分析
擴增子獲得流程:
一對寡核苷酸用來獲得一個擴增子。將這些寡核苷酸雜交至未片段化的基因組DNA(96孔板),隨后進行延伸和連接以形成DNA模板(帶引物序列的目標區(qū)域)。使用隨試劑盒提供的索引接頭,文庫被索引,PCR擴增,然后在測序之前pool到單個試管中。
A癌癥panel寡核苷酸探針的雜交
B延伸和連接
C通過PCR添加索引(indexes)和測序接頭
D收獲準備測序的擴增子
TSACP性能規(guī)格
Panel 大小35 kb;內(nèi)容 212 amplicons;擴增子大小 170–190 bp;DNA Input 250 ng
Assay Time < 7 hrs, 2.5 hrs hands-on;Enrichment Specificity > 85%;Coverage Uniformity > 85% at 0.2× mean
Dropouts* 0 (Dropouts are defined as amplicons having no sequencing coverage when the sample achieves a mean sequencing depth of > 1000×.)
TSACP目標基因列表
ABL1 | EGFR | GNAS | MLH1 | RET |
AKT1 | ERBB2 | HNF1A | MPL | SMAD4 |
ALK | ERBB4 | HRAS | NOTCH1 | SMARCB1 |
APC | FBXW7 | IDH1 | NPM1 | SMO |
ATM | FGFR1 | JAK2 | NRAS | SRC |
BRAF | FGFR2 | JAK3 | PDGFRA | STK11 |
CDH1 | FGFR3 | KDR | PIK3CA | TP53 |
CDKN2A | FLT3 | KIT | PTEN | VHL |
CSF1R | GNA11 | KRAS | PTPN11 |
|
CTNNB1 | GNAQ | MET | RB1 |
|
名詞解釋:Pan-Cancer(泛癌)
基因組圖譜泛癌計劃:由于起源部位、細胞類型、基因突變形式的不同,腫瘤可表現(xiàn)出不同的形態(tài)。這些因素同時影響腫瘤的治療效果。雖然已經(jīng)證實許多基因的改變直接導致了表型的改變,然而,許多腫瘤譜系中復雜分子機制依然未*闡明。因此,腫瘤基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)研究網(wǎng)絡(luò)分析了大量人類腫瘤,以期發(fā)現(xiàn)DNA、RNA、蛋白質(zhì)和表觀遺傳學水平的分子改變。含豐富數(shù)據(jù)的結(jié)果給我們提供了一個機會,對整個腫瘤譜系的共性、個性及新觀點形成一個整體描繪?;蚪M圖譜泛癌計劃zui先比較了12種腫瘤類型。對不同腫瘤分子改變及其功能的分析,未來會告訴我們?nèi)绾螌⒂行У闹委煼椒☉?yīng)用于類似基因表型的腫瘤。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel Kit 組件 (FC-130-1008):
四個試劑盒包括兩個Pre-Amplification、一個Post-Amplification和一個TruSeq Amplicon - Cancer Panel Oligo Kit, Pre-Amplification試劑盒。
TSACP訂購信息
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 |
Illumina | FC-130-1008 | TruSeq Amplicon - Cancer Panel | 96 樣本 |
TSACP搭配試劑:
Illumina FFPE QC Kit WG-321-1001
TruSeq Custom Amplicon Index Kit (96 indices, 384 Samples) FC-130-1003
MiSeq Reagent Kit (300-cycles - PE) MS-102-2002
可選: TruSeq Index Plate Fixture and Collar Kit (2 Each) FC-130-1007
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