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在使用RNA提取試劑前有哪些注意事項(xiàng)呢
更新時(shí)間：2022-06-14 點(diǎn)擊次數(shù)：1009次
TRIzon是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍廣泛，可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。
樣品在TRlzon中被充分裂解的同時(shí)能夠最大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA分布在上清層中。
收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無(wú)蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR.Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等。
下面讓我們來(lái)了解一下使用RNA提取試劑前的準(zhǔn)備事項(xiàng)吧:
1.預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面:
1)使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。3)配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。
4)操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勘換手套。2.提取的樣品避免反復(fù)凍融，否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3，本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會(huì)導(dǎo)致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)物品，如手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。
4.樣品用TRIzon勻漿后，如不即刻加入氯仿，置于-70°℃下可放置一個(gè)月以上。
5，保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8C可以保存一周，-20C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA，Northern Blot等。
6.若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感，建議用不含RNase的DNasel(貨號(hào):CW2090A)對(duì)RNA進(jìn)行處理。
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