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教你如何使用硅藻土純化牛血清白蛋白
更新時(shí)間：2022-04-24 點(diǎn)擊次數(shù)：1523次
用硅藻土純化牛血清白蛋白(去除牛血清白蛋白中的核酸酶)時(shí)，使用的懸浮液為Tris-HCl緩沖溶液，濃度為50mM，pH為7.8;使用的透析液為Tris-HCl緩沖溶液，濃度為10mM，pH為8.0;硅藻土以及懸浮液使用前在121℃條件下滅菌30min。具體的純化步驟為：
(1)將6g硅藻土用60mL懸浮液(硅藻土與懸浮液的比例為1:10w/v)混合，置于100℃沸水浴中5min，室溫條件下攪拌5min，5000rpm離心10min，丟棄上清液;重復(fù)上述洗滌步驟3次后，將洗滌后的硅藻土在60mL懸浮液中分散均勻，得到吸附劑分散液，在4℃條件下儲(chǔ)存?zhèn)溆?
(2)將2.5g牛血清白蛋白在12.5mL懸浮液中(牛血清白蛋白與懸浮液的比例為1:5w/v)溶解分散均勻，加入18.75mL吸附劑分散液，在4℃攪拌30min后，在該溫度下10000rpm離心10min，收集上清;
(3)在上清液中加入18.75mL吸附劑分散液(牛血清白蛋白懸浮液與吸附劑分散液的比例為1:1.5v/v)，在4℃攪拌30min，在該溫度10000rpm離心10min，收集上清液;再重復(fù)一次;
(4)收集的上清用0.45μm膜過濾后，即得牛血清白蛋白純化液;
(5)采用分子截留量為10KD的超濾濃縮管2500rpm離心20min，對(duì)蛋白濃度進(jìn)行超濾濃縮，得到超濾牛血清白蛋白樣品;
(6)將超濾牛血清白蛋白樣品采用分子截留量為14000Da的透析袋4℃條件下攪拌透析2h后，更換透析液透析過夜，超濾牛血清白蛋白樣品與透析液的體積比為1:15;
(7)透析后的樣品測(cè)定蛋白濃度后，稀釋至10mg/ml，分裝成1mL/支，保存于-20℃。
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