企業(yè)動態(tài)
1、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳
瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物，是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質，其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經過化學修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖，在結構上比較脆弱，因此在較低的溫度下便會熔化，可用于DNA段的制備電泳。
聚丙烯酰胺凝膠主要有兩種方式:一是用于分離和純化雙鏈DNA段的非變性聚丙烯酰胺凝膠。在未變凝膠中分離DNA的缺點是DNA的遷移率受堿基組成和序列的影響。由于無法得知未知DNA的遷移是否反常，故不能用未變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳確定雙鏈DNA的大小。二是用于分離及純化單鏈DNA段的變性聚丙烯酰胺凝膠。這類聚丙烯酰胺凝膠是在核苷酸堿基配對抑制劑(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成，變性DNA的移動速度同其堿基組成及序列幾乎*無關，故可用于分離及純化單鏈DNA段和DNA測序等。
2、脈沖電場凝膠電泳
普通的凝膠電泳技術顯然是無法分離如此超大分子量的DNA分子的。
1984年，D.C.Schwartz和C.R.Cantor發(fā)明的脈沖電場凝膠電泳(Pulsed-FieldGelElectrophoresis，PFGE)技術，可以成功地用來分離整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子。在常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳中，超過一定大小范圍的所有的雙鏈DNA分子，都是按相同的速率遷移的。這是因為它們在單向恒定電場的作用下，僅以"一端向前"的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中，DNA分子的遷移方向是隨著所用的電場方向的周期性變化而不斷改變的。
在標準的PFGE中，頭一個脈沖的電場方向與核酸移動方向成45°夾角，而下一個脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側亦成45°夾角。由于加壓在瓊脂糖凝膠上的電場方向、電流大小及作用時間都在交替地變換著，這就使得DNA分子能夠隨時地調整其游動方向，以適應凝膠孔隙的無規(guī)則變化。與分子量較小的DNA分子相比，分子量較大的DNA分子需要更多的次數來更換其構型和方位，以使其可以按新的方向游動。因此，在瓊脂糖介質中的遷移速率也就顯得更慢一些，從而達到分離超大分子量DNA分子的目的。應用脈沖電場凝膠電泳技術，可成功地分離到分子量高達10bp的DNA大分子。
