造血干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基使用說明
更新時間：2016-04-25 點擊次數(shù)：1699次
造血干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基方法概述：
分離混合血液白細(xì)胞早期的方法，總是伴隨紅細(xì)胞聚集，只輕微影響白細(xì)胞。通過離心，紅細(xì)胞密度增加聚集，同時可以從離心管上部收集白細(xì)胞。
Byum提出了一種更方便，通過使用Ficoll 甲泛影鈉溶液離心快速分離方法。稀釋的血液在Ficoll甲泛影鈉溶液中分層，低速短時離心。紅細(xì)胞和沉降到管底的粒細(xì)胞，和單個核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）和血小板可以從兩個分層之間收集。
許多研究者不斷努力，修訂了Byum方法，MP生物醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的LSM，方法的*之處是運用,泛影鈉成功的代替了甲泛影鈉。
以下的操作步驟是zui初由Byum.設(shè)計的程序的眾多改良版本中的一種。此程序的改良是通過運用除去血液中的纖維蛋白或抗凝血劑處理人體血液；這種改良對于其他物種來源血液或者其他組織非常有必要。
1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2.無菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。
3.混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2 ml 生理鹽水
4.仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個明顯的分層。人造血干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基不要將稀釋血液混合入LSM中。
5.室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時可以再LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞，如上圖所示。
6.吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7.吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
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