轉(zhuǎn)染試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
1. 使用前預(yù)熱試劑至常溫。
2. 轉(zhuǎn)染前一天，接種適量細(xì)胞懸液至100-mm培養(yǎng)皿、60-mm培養(yǎng)皿或6孔板中，放置到潮濕37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
3. 次日，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，加入新鮮培養(yǎng)液。
4. 取兩根無菌1.5ml eppendorf管，分別記為A、B。按下表，根據(jù)培養(yǎng)皿不同而加入不同體積的試劑：
5. 用移液管混勻B管中溶液并將B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中。用氣泡法混勻轉(zhuǎn)染混合物，這一步盡量在2分鐘內(nèi)完成，室溫孵育30分鐘。
6. 將混合物逐滴加入到細(xì)胞中，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使混合物均勻分布在細(xì)胞表面。
7. 放置到潮濕37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
8. 次日早上用新鮮培養(yǎng)基更換細(xì)胞培養(yǎng)液，于37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24-48h。
9. 檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率(如熒光觀察，蛋白質(zhì)印跡等)。
轉(zhuǎn)染試劑盒使用注意事項(xiàng)：
轉(zhuǎn)染前以細(xì)胞融合度不超過80%為宜，接種密度因所采用的細(xì)胞系和細(xì)胞的倍增時(shí)間而有所不同。
高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋。
轉(zhuǎn)染時(shí)，B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中，請勿混亂順序。
溶液的pH值關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免把轉(zhuǎn)染試劑盒的溶液長時(shí)間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。
轉(zhuǎn)染時(shí)由于質(zhì)粒不同、細(xì)胞不同，*的質(zhì)粒用量需自行摸索。
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