高品質(zhì)的游離DNA (cell free DNA) NGS文庫(kù)構(gòu)建 | ||||||||||||||||||||||||||
ThruPLEX® Plasma-Seq Ki | ||||||||||||||||||||||||||
· 專為cfDNA設(shè)計(jì):經(jīng)過優(yōu)化的修復(fù)及連接試劑 · 高品質(zhì)NGS文庫(kù):高的文庫(kù)多樣性,在寬廣的GC含量范圍內(nèi),可以達(dá)到高檢測(cè)再現(xiàn)性 · 起始量范圍廣:<1 ng到30 ng cfDNA量 · 快速簡(jiǎn)便:1個(gè)反應(yīng)管、2小時(shí)、3步反應(yīng)的簡(jiǎn)單操作,無需純化或樣品轉(zhuǎn)移步驟 · 應(yīng)用領(lǐng)域:液態(tài)活檢、ctDNA、目標(biāo)區(qū)域測(cè)序等領(lǐng)域文庫(kù)構(gòu)建 · 兼容自動(dòng)化平臺(tái):Beckman FXP Workstation | ||||||||||||||||||||||||||
■ 產(chǎn)品說明: | ||||||||||||||||||||||||||
ThruPLEX Plasma-seq Kit基于ThruPLEX技術(shù),并用于血漿來源cfDNA高品質(zhì)NGS文庫(kù)構(gòu)建。該試劑已針對(duì)cfDNA進(jìn)行了專門優(yōu)化,在保持樣本GC代表性的基礎(chǔ)上,盡可能的提升了文庫(kù)的復(fù)雜度。文庫(kù)可用于CNV分析、全基因組測(cè)序分析或是采用一些panel針對(duì)目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行捕獲富集后的DNA分析,如Agilent SureSelect and Roche NimbleGen SeqCap EZ。
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DNA HT dual index kits | ||||||||||||||||||||||||||
DNA HT dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫(kù)制備試劑盒搭配使用,用以構(gòu)建Illumina測(cè)序文庫(kù)的index引物試劑盒。這些試劑盒包含Illumina Nextera® XT v2 index序列對(duì)應(yīng)的index引物,多可提供384種不同的雙端index,用于樣本混合測(cè)序時(shí)的區(qū)分。其中index引物預(yù)先分裝在4個(gè)不同條形碼標(biāo)記的index微孔板中,每個(gè)微孔板可提供不同的96種index組合(Code No.R400660-R400663),index微孔板(96N Sets A-D)的每個(gè)孔提供的量足夠進(jìn)行一次測(cè)序反應(yīng);另一種是一套中有24個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)管,每個(gè)反應(yīng)管中包含不同的雙端index組合(Code No.R400664),且每個(gè)反應(yīng)管(24N)提供的量足夠進(jìn)行兩次測(cè)序反應(yīng)。 | ||||||||||||||||||||||||||
DNA unique dual index kits | ||||||||||||||||||||||||||
DNA unique dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫(kù)制備試劑盒搭配使用,用以構(gòu)建Illumina測(cè)序文庫(kù)的index引物試劑盒。這些試劑盒包含“IDT for Illumina UD”對(duì)應(yīng)的index引物,多可提供96種不同雙端index,用于樣本混合測(cè)序時(shí)的區(qū)分。index引物預(yù)先分裝在不同的4組各24個(gè)單獨(dú)的管中,其中每組可提供24種不同index引物組合(Code No.R400665-R400668)。每個(gè)index引物管(24U Sets A-D)提供的量足夠進(jìn)行兩次測(cè)序反應(yīng)。 | ||||||||||||||||||||||||||
DNA single index kits | ||||||||||||||||||||||||||
DNA single index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫(kù)制備試劑盒搭配使用,用以構(gòu)建Illumina測(cè)序文庫(kù)的index引物試劑盒。這些試劑盒包含與“TruSeq LT set A”序列對(duì)應(yīng)的index引物,可提供24種單端index,用于樣本混合測(cè)序時(shí)的區(qū)分。index引物預(yù)先分裝在不同的2組各12個(gè)單獨(dú)的管中,其中每組可提供12種不同index引物組合(Code No.R400695和R400697)。每個(gè)index引物管(12U Sets A-B)提供的量足夠進(jìn)行8次測(cè)序反應(yīng)。
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圖1. ThruPLEX® 技術(shù)概要。ThruPLEX Plasma-seq Kit技術(shù)3步反應(yīng)即可完成針對(duì)cell free DNA的建庫(kù)工作。1~30 ng含量的cf DNA首先高效的進(jìn)行末端修復(fù)。通過采用莖環(huán)形接頭(無單鏈尾巴)進(jìn)行高效平端連接,降低了背景。封閉的5’端阻止了接頭-接頭二聚體形成。隨后未使用的接頭被降解,進(jìn)一步降低背景。高保真度擴(kuò)增的方式完成以上反應(yīng),并獲得含有illumina index的文庫(kù)。 |
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.) |
圖2. 高cfDNA文庫(kù)多樣性、更少的Unmapped Reads。ThruPLEX Plasma-seq Kit構(gòu)建的文庫(kù),具有高的多樣性和低的duplicates和unmapped reads。圖中表示cfDNA分別提取于3份血漿樣品,文庫(kù)定量采用Qubit熒光定量。Bioanalyzer測(cè)定mononucleosomal DNA在各樣品的量分別為0.09 ng、0.62 ng、15.44 ng。Pooled libraries采用illumina NextSeq 500 paired end模式測(cè)序,且每個(gè)文庫(kù)產(chǎn)生17 M到25 M reads。每個(gè)文庫(kù)在down-sampling數(shù)據(jù)至17 M reads以后,計(jì)算Duplication rates。 |
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.) |
圖3. 優(yōu)異的靶向測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建能力。圖中所示ThruPLEX Plasma-seq Kit構(gòu)建的文庫(kù)通過panel進(jìn)行高效捕獲,對(duì)kinome進(jìn)行深度測(cè)序分析以檢測(cè)突變。3個(gè)血漿樣品分別起始建庫(kù)量為5 ng、6.5 ng、10 ng,三次重復(fù)。目標(biāo)區(qū)域采用SureSelectXT2的ClearSeq Human DNA Kinome Panel進(jìn)行捕獲,并用Illumina Miseq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序,平均每個(gè)文庫(kù)獲得5 M reads,目標(biāo)堿基被成功捕獲分析。 |
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.) |
圖4. 高重復(fù)性的、無偏倚的GC覆蓋度。針對(duì)人類基因組,ThruPLEX Plasma-seq Kit表現(xiàn)出高再現(xiàn)性、低偏倚GC覆蓋度NGS文庫(kù)構(gòu)建能力。9次獨(dú)立的血漿樣品文庫(kù)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ThruPLEX重復(fù)性高于其它產(chǎn)品。文庫(kù)的制備是利用的1 mL血漿來源cfDNA,后續(xù)采用illumina NextSeq 500進(jìn)行測(cè)序。作為對(duì)比,A公司試劑構(gòu)建了4份獨(dú)立血漿樣品的文庫(kù)。 |
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.) |
圖5. Karolinska協(xié)會(huì)和CRUK測(cè)試的結(jié)果。5 ng游離cf DNA采用ThruPLEX Plasma seq Kit進(jìn)行illumina文庫(kù)構(gòu)建。結(jié)果表明利用Hiseq平臺(tái)進(jìn)行的Low-pass WGS,每個(gè)文庫(kù)能獲得接近12.5 M reads。 |
(*以上數(shù)據(jù)來源于Karolinska 協(xié)會(huì),瑞典) |
■ 產(chǎn)品組成 |
· Template Preparation Buffer(Red) · Template Preparation Enzyme(Red) · Library Synthesis Buffer(Yellow) · Library Synthesis Enzyme(Yellow) · Library Amplification Buffer(Green) · Library Amplification Enzyme(Green) · Nuclease-Free Water(Clear) · Indexing Reagents(Blue) · Quick Protocol(N/A) |
■ 保存 |
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