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技術(shù)支持

Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝和競爭產(chǎn)品的比較
更新時間:2018-02-06   點擊次數(shù):2599次

 

Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝和競爭產(chǎn)品的比較

 

Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝支持NK細(xì)胞的快速擴(kuò)增,NK細(xì)胞產(chǎn)量高(約8.6 萬億,擴(kuò)增290倍),細(xì)胞殺傷力強(qiáng)(效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞=5:1 下殺傷力77.9%),與競爭產(chǎn)品相比很有優(yōu)勢。

 

 

比較項目

Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝

競爭產(chǎn)品B: NK 試劑盒

競爭產(chǎn)品C: NK 培養(yǎng)基

接種容器

預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶

提供包被劑

沒有提供培養(yǎng)瓶和包被劑

組份

Pre-coated T-75 flask 抗體預(yù)包被T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶

50 mL NK細(xì)胞活化培養(yǎng)基

1.8 mL NK細(xì)胞活化添加劑

1L  NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基

1mL包被劑

80mL活化培養(yǎng)基

2 L擴(kuò)增培養(yǎng)基+1 mL 添加劑

500mL 培養(yǎng)基/瓶

操作友好度

方法清除,操作簡單

沒有zui終方法,NK培養(yǎng)需要自行優(yōu)化

沒有方法

抗凝劑兼容性

肝素,檸檬酸鈉

肝素

肝素,檸檬酸鈉

細(xì)胞產(chǎn)量(14天,30mL 血樣)

約 3 萬億

約 0.64萬億

約 4.2 萬億

擴(kuò)增倍數(shù)

約100倍

約32倍

約140倍

CD3-CD56+表型,14天

83%

68%

6%

NK效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量

約2.5萬億

約0.4萬億

約0.3萬億

細(xì)胞殺傷力(ET=5:1,靶細(xì)胞K562)

77.9%

54.1%

57.6%

培養(yǎng)體積

1.5L

1.0L

1.0L

周期

14天

14天

14天

 

 

Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝可以用于NK細(xì)胞的大量擴(kuò)增,并且具有高活力和高殺傷能力。Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝飽和預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶,KBM NK活化培養(yǎng)基,KBM NK活化添加劑和KBM NK擴(kuò)增培養(yǎng)基。前三個特別設(shè)計用于NK活化,zui后一個KBM NK擴(kuò)增培養(yǎng)基于NK細(xì)胞擴(kuò)增。NK活化培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基生產(chǎn)都是使用高質(zhì)量試劑和cGMP級的原料。培養(yǎng)基唯二所含培養(yǎng)基是注射級的血清白蛋白和重組人胰島素。

 

 

 

介紹

自然殺傷細(xì)胞(NK)是重要的免疫細(xì)胞,能識別并清除腫瘤和病毒感染。體外大量培養(yǎng)NK細(xì)胞,滿足過繼性免疫治療所需一向比較困難。據(jù)資料,現(xiàn)有的培養(yǎng)方法都是采用擴(kuò)增培養(yǎng)基搭配細(xì)胞因子(IL-2,IL-7,IL-15)的方案,需要研究者自行優(yōu)化后使用。

Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法,所得NK細(xì)胞擴(kuò)增能力強(qiáng),活性和殺傷能力高。研究者無需優(yōu)化,而且使用步驟精簡。和競爭產(chǎn)品比較了NK細(xì)胞產(chǎn)量,活力和NK 細(xì)胞體外 陽性表達(dá)比率和殺傷能力。

 

鑒定方法

免疫表型

收獲細(xì)胞表面標(biāo)記表達(dá)評估方法:CD3-CD56+陽性率。

100 μL PBS 加入 1 x 106 個細(xì)胞,CD3 FITC +CD56 PE抗體染色 20min,染色過程 室溫避光。孵育后,PBS 緩沖液清洗細(xì)胞,200 μL PBS 重懸,用于流式細(xì)胞分析。每個樣本收集1萬個events,再用histogram overlay subtraction method using BD Accuri C6 軟件。

 

CCK-8 細(xì)胞毒性檢測

 K-562 細(xì)胞作為靶細(xì)胞。1 x 105 cells/mL的K-562 細(xì)胞和 5 x 105 cells/mL的效應(yīng)細(xì)胞共培養(yǎng)(96孔培養(yǎng)板三份,終體積200 μL/孔),37°C 過夜。分析前,每孔添加20 μL細(xì)胞計數(shù)試劑( Cell Counting Kit-8 solution ,CCK8, Sigma Cat. No. 96992), 37°C ,5% CO2孵育1 h。數(shù)據(jù)讀?。篠pectraMax® M4 (Molecular Devices) multifunction microplate reader。

 

結(jié)果

 

 

圖1 使用不同品牌的NK擴(kuò)增試劑盒比較細(xì)胞生長曲線和擴(kuò)增能力。與競爭產(chǎn)品B,C相比,Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝擴(kuò)增能力具有優(yōu)勢。

 

 

 

 

圖2 CCK-8 細(xì)胞殺傷活性檢測。NK細(xì)胞與K-562細(xì)胞共培養(yǎng)16 h后(效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞=5:1 ),Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝培養(yǎng)的NK 細(xì)胞殺傷能力77.9%競爭產(chǎn)品B (54.1%) 和C(57.6%) 有優(yōu)勢。

 

 

 

 

圖3 流式細(xì)胞分析NK細(xì)胞表面標(biāo)志物。使用CD3-CD56+陽性率評估收獲細(xì)胞中NK細(xì)胞占比。Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝占比83.0%,高于競爭產(chǎn)品B (67.6%)和C(6.4%)。

 

結(jié)論
Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝支持NK細(xì)胞的快速擴(kuò)增,NK細(xì)胞產(chǎn)量高(約8.6 萬億,擴(kuò)增290倍),細(xì)胞殺傷力強(qiáng)(效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞=5:1 下殺傷力77.9%),與競爭產(chǎn)品相比很有優(yōu)勢。

Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法。無需優(yōu)化,而且使用步驟十分精簡。

 

原文:Zhu Xuejing, Liu Jian Corning Incorporated

Corning Life Sciences Asia Technology Center Shanghai 201206, China

 

 

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