轉(zhuǎn)染試劑盒如何使用才能發(fā)揮Z大作用
更新時(shí)間：2017-01-06 點(diǎn)擊次數(shù)：1726次
可生物降解的聚合物技術(shù)，是一項(xiàng)技術(shù)。在此技術(shù)的基礎(chǔ)之上，合成了新一代的可生物降解多價(jià)陽離子聚合物，以此聚合物作為載體，并成功研發(fā)了轉(zhuǎn)染試劑盒。轉(zhuǎn)染試劑盒較市場上的其他試劑，具有更高的轉(zhuǎn)染效率及更低的毒性。轉(zhuǎn)染試劑盒不但適用于HEK293, COS-7, NIH-3T3, HeLa, CHO等常用細(xì)胞系，同樣適用于眾多難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
轉(zhuǎn)染試劑盒特點(diǎn)：
、低毒、廣譜；
操作簡便；
化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
轉(zhuǎn)染試劑盒使用方法
1、細(xì)胞鋪板：
轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)進(jìn)行細(xì)胞的鋪板，以便在轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞的密度大約在80%左右。
注：培養(yǎng)液中的血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染效率。
2 、轉(zhuǎn)染試劑盒復(fù)合物的制備和轉(zhuǎn)染的具體方法：
轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫10分鐘。下面，以轉(zhuǎn)染35 mm培養(yǎng)皿為例，說明轉(zhuǎn)染的具體方法（如果在別的培養(yǎng)器皿中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，各試劑的使用量見表1）：
（1）在轉(zhuǎn)染前30-60分鐘，將培養(yǎng)液更換成含血清和抗生素的新鮮培養(yǎng)液。
（2）將1 μg 質(zhì)粒DNA稀釋到50 μL無血清的高糖DMEM，用移液槍吹吸3-4次。
（3）將3 μL HighMax轉(zhuǎn)染試劑稀釋到50 μL無血清的高糖DMEM，用移液槍吹吸3-4次。
注：不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和轉(zhuǎn)染試劑盒的稀釋！因?yàn)檗D(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
（4）將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑盒一次性全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，立即用移液槍吹吸3-4次。
注：此混合的順序不能反向進(jìn)行！
（5）室溫放置10-15分鐘，以形成轉(zhuǎn)染試劑盒復(fù)合物。
（6）將上述100 μL 轉(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿，讓轉(zhuǎn)染試劑盒復(fù)合物分散均勻。
（7）轉(zhuǎn)染后12-18小時(shí)，去除含轉(zhuǎn)染試劑盒復(fù)合物的培養(yǎng)液，加入含血清和抗生素的新鮮培養(yǎng)液。
（8）24-48小時(shí)后檢測轉(zhuǎn)染的效率。
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