培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見，必須通過特定的檢測方法進(jìn)行檢測。檢測支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測、RT-PCR檢測以及DNA熒光染色檢測。上述檢測方法中，除DNA熒光染色檢測外操作步驟相對比較煩瑣并且所需時(shí)間較長。本支原體檢測試劑盒是通過Hoechst染色來檢測支原體的。支原體檢測試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)體系被支原體污染之后，支原體*的代謝酶類會(huì)產(chǎn)生支原體*的代謝產(chǎn)物，而真核細(xì)胞或細(xì)菌不會(huì)產(chǎn)生這種代謝產(chǎn)物，因而可以通過檢測這種代謝產(chǎn)物而檢測支原體的存在。如果樣品中含有支原體特異的代謝產(chǎn)物，反應(yīng)系統(tǒng)(包括樣品、反應(yīng)孔與反應(yīng)緩沖液)會(huì)產(chǎn)生藍(lán)綠色，代謝產(chǎn)物濃度越高，顏色越深。
支原體檢測試劑盒儲(chǔ)存條件
該試劑盒已滅菌封裝。4-25℃儲(chǔ)存，可達(dá)12個(gè)月。
支原體檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法
1. 所有操作均在室溫(22-28℃)下進(jìn)行。
2. 打開檢測板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。
3. *個(gè)孔加入10 μL陰性對照，其他孔加入10 μL待測樣品或陽性對照。
4. 輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。
5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。
6. 輕輕混勻，室溫孵育4分鐘。
7. 每孔加入5μL Stop Solution，輕輕混勻。
8. 可在30分鐘內(nèi)觀察樣品顏色的變化或進(jìn)行拍照保存：
a) 如果待測樣品的顏色深于陰性對照，表明樣品被支原體污染。
b) 如果待測樣品的顏色與陰性對照相同，表明樣品沒有支原體污染。
如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。支原體檢測試劑盒如用于六孔板樣品檢測，至少可以檢測100個(gè)樣品。
員_a.png)